植物組織培養外植體的滅菌處理

　　收集到的外植體在自然環境表面會攜帶大量的微生物，如不妥善處理，會污染培養基，導致培養失敗。所以在適當的季節，適當的母株，以及適當的外植體材料的選擇上都需要進行相應的殺菌處理。那么植物組織培養外植體如何進行滅菌處理：

　　1.組培中常用的消毒試劑

　　消毒劑使用濃度/%消除難易消毒時間/min滅菌效果次氯酸鈉2易5-30很好次氯酸鈣9-10易5-30很好漂白粉飽和溶液易5-30很好升汞0.1-1較難2-10最好酒精70-75易0.2-2好過氧化氫10-12最易5-15好溴水1-2易2-10很好硝酸銀1較難5-30好抑菌劑2-5中30-60較好

　　2.消毒方法

　?、偈紫?，用水沖洗，將收集到的植物材料除去不用的部分，將材料切成適當大小，即滅菌容器可放入為宜。放置水龍頭下流水沖洗1-2小時(可加入吐溫等表面活性劑以提高清洗效果)，沖洗時間取決于材料的清潔程度。容易漂浮或細小的物料，可用紗布袋裝好沖洗。水洗對于嚴重污染物料尤其有用。

　?、诓牧舷?，在超凈工作臺上，先用酒精處理材料進行表面浸潤(由于酒精的滲透能力很強，不同材料應注意控制浸潤時間)。材料的滅菌處理然后使用所選殺菌劑。材料不同，滅菌劑的滅菌時間也不同。摸索式的調整是必要的。特定的運作程序是：

　　將水洗后的物料放入滅菌培養瓶，然后倒入所選消毒液，輕輕攪動培養瓶，使物料與消毒液充分接觸，排出泡沫，使消毒徹底。過了時間，消毒液要倒入備好的容器中，要注意不能將物料倒出，傾凈后立即倒入無菌水，輕攪涮。洗滌時間和次數根據洗滌材料和洗滌液的選擇確定。

　?、蹮o菌水沖洗法

　　用預先準備好的無菌清水涮洗物料，涮洗時間為每次2-5 min左右，同時根據所用消毒液的種類，涮洗約3-l0次(對于易去除的消毒液，洗3-5次即可，對于難以去除的消毒液，應洗8-10次)。無菌水洗是為了消除殺菌劑殺傷植物細胞的副作用。

　　3.植物組織培養外植體滅菌處理的注意事項：

　　1.滅菌時間：從倒人消毒液起，直至倒入無菌水。必須記錄時間，以便比較消毒效果和隨后調整試驗條件。

　　2.有時需要在消毒液中加入吐溫-80等表面活性劑，這些表面活性劑的主要作用是使消毒液更易展開，更易浸人于消毒材料的表面。但是加入后對材料的傷害也在增加，一定要注意用量和滅菌時間，一般情況下表面活性劑加入滅菌液的量不能超過0.6%。

　　3.酒精滲透性很強，幼嫩的材料容易在酒精中變綠，因此浸泡時間不可過長，防止酒精殺死植物的組織細胞。

　　4.氯化汞除外，可在短期內貯存。其它消毒劑應在使用前與之按比例混合。