甘蔗莖尖脫毒組培苗保綠實驗的研究

　　甘蔗是無性繁殖作物，常規育種利用種莖繁殖，繁殖系數低，用種量大。應用植物組織培養技術可以大大提高甘蔗的繁殖系數。對加速繁殖甘蔗良種，具有重要的意義。而甘蔗莖尖脫毒組培苗在繁殖過程中受影響的因素很多，其中生根階段又是甘蔗組培苗繁殖生長的最后一關，生根質量的好壞直接影響甘蔗組培苗的假根成活率，也就影響到甘蔗良種的繁殖數量，因此，本文主要探討幾種重要物質對甘蔗生根效果的影響，另外對甘蔗的保綠質量的好壞，對甘蔗的良種繁殖也有很重要的影響：延長種苗種植時間;提高種苗成活率;使其生命力增強;抗逆性增高，著手探討其對甘蔗組培苗保綠效果的影響。結果發現：其對甘蔗組培苗確實有保綠效果。

　　1 . 材料與方法

　　1.1 參考材料：云蔗99-601

　　1.2 甘蔗莖尖脫毒組培苗生根實驗

　　取生長整齊，均勻，繼代數一致，每瓶苗數一致的云蔗99-601莖尖脫毒苗在MS培養基中進行生根實驗。方案如下：

　?、伲翰煌琋AA濃度對云蔗99-601莖尖脫毒苗生根的影響，共設6個濃度，分別為0，1，1.5，2，3，3.5，mg/L，每濃度30瓶。

　?、冢翰煌腎AA對云蔗99-601莖尖脫毒苗生根的影響，共設6個濃度分別為0，0.5，2，3，4，5，mg/L，每濃度30瓶。

　?、?不同的濃度的硅對云蔗99-601莖尖脫毒苗生根及保綠的影響，共設11個濃度，分別為0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.5，1，1.5，1.8，2.3，3mg/L，每濃度30瓶。

　?、埽篘AA和硅配合對云蔗99-601生根和NAA和保綠的實驗，共設6個濃度分別為：0，0.3，0.5，1，1.5，2mg/L的硅，各加上MS+NAA2mg/L，每濃度30瓶。

　?、荩荷炒卜N植試驗：取上述1.2中各濃度的NAA,IAA,硅的組培甘蔗苗，各取10瓶進行沙床種植。每對照2行，共42行。

　　2 . 結果分析

　　2.1.1.不同NAA濃度對云蔗99-601莖尖脫毒苗生根的影響列在表1。

　　表1.接種33天后不同NAA濃度對云蔗99-601莖尖脫毒苗生根

　　從表1可以看出：NAA濃度不同，其對甘蔗莖尖組培苗生根的影響也不同，以2mg/L的NAA對云蔗99-601的生根影響效果最好。

　　2.1.2.不同濃度的IAA對云蔗99-601莖尖脫毒苗生根的影響列在表2

　　從表2可以看出IAA對甘蔗生根有一定的影響，隨著IAA濃度的增加，甘蔗的生根效果越來越好,到2mg/L時生根最好：根濃而密，較粗壯;苗墨綠;黃葉基本沒有。以后隨著IAA濃度的增加，甘蔗的生根效果越來越差。

　　2.1.3.不同濃度〔1-3mg/L〕的硅在不同時間對云蔗99-601生根的影響列在表3

　　表2不同濃度的IAA對云蔗99-601莖尖脫毒苗生根的影響

　　表3不同濃度〔1-3mg/L〕的硅在不同時間對云蔗99-601生根的影響

　　從表3可知：30天之內，各濃度的硅促進生根的差別不明顯，但較長時間(如40天)，各濃度的硅促進生根的差別較明顯，以1mg/L的促進生根的效果最好。

　　另外，在各時間段，不同濃度的低濃度硅〔濃度分別為0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.5mg/L 〕對云蔗99-601生根差別也不明顯。生根率都在40%-60%之間，其中以0.5mg/L的促進生根相對較好，達到59%。

　　比較硅和NAA的甘蔗苗，發現各濃度的硅都對甘蔗苗的保綠效果明顯，明顯高于各濃度NAA的培養基的甘蔗苗，在培養基中加入硅的甘蔗苗明顯地黃花少，長勢好，而其中只加入NAA的明顯地黃花多，長勢弱，差別非常明顯。其中以加入0.4-0.5mg/L的硅保綠效果最好;比較各濃度的IAA和NAA甘蔗苗，發現IAA仍有部分的保綠效果，但沒硅明顯。

　　左為IAA，由左至右的濃度分別為:0.52345mg/L，右為NAA由左至右的濃度分別為:11.5233.5 mg/L

　　2.1.4.NAA和硅配合對甘蔗生根及保綠的影響試驗：

　　按保綠來看：接種80后天以MS+ Si0.5mg/L的效果最好，苗綠少，明顯地苗壯，與其它濃度對照差異非常明顯;

　　按生根情況來看，以MS+NAA 2mg/L+Si1mg/L的生根最好，具體情況如下表

　　表4：.NAA和硅配合對甘蔗生根的影響

　　2.1.5.各濃度的NAA,IAA,硅培養的云蔗99-601莖尖脫毒苗組培，組培苗的沙床種植試驗，由NAA 3.5，3，2，1.5，1.0，mg/L各取10瓶，IAA 5,4.3,2,0.5,mg/L各10瓶。硅3，2.3，1.8，1.5，1，0.5，0.4，0.3，0.2，0.05，mg/L各取10瓶，沙床種植，每種對照種兩行，共42行，沙床種植30天后，統計結果如下：

　　從長勢方面看：培養基中加硅0.2-3mg/L甘蔗苗的長勢明顯高于加人IAA和NAA的，培養基中加NAA的長勢最差，加IAA的次之，加硅的最好。但培養基中加NAA 3mg/L和NAA 2mg/L的甘蔗苗明顯莖粗。在所有沙床種植甘蔗苗中，以MS培養基(不加其它物質)長勢最差，苗細而弱，倒伏多，死亡率高，以加NAA3mg/L的莖最粗，培養基中加NAA 3mg/L，和NAA 2mg/L的沙床種植甘蔗苗長勢不明顯，在培養基中加硅0.4，0.5，1，1.8，2.3mg/L的沙床種植甘蔗苗的長勢差別不明顯，其中以培養基中加入硅1mg/L 和硅1.5mg/L的株莖最高，長勢也最好，在MS培養基中加入IAA 的長勢僅次于硅，MS中加入IAA 3mg/L和IAA 2mg/L的變化不明顯，但它們如和加IAA 4mg/L和IAA 5mg/L的相比變化卻很明顯。長勢明顯高于后者。

　　3 .小結與討論

　　目前，甘蔗的良種繁殖除了采用常規的種莖繁殖以外，就是采用組織培養生物技術進行良種快繁，組織培養生物技術繁殖速度快，能保持良種的種性，可以克服常規的種莖繁殖率低的缺點，而且還可以生產出無病蟲害的健康種苗。在甘蔗組織培養的整個過程中，甘蔗組培苗沙床生根階段的生根質量的好壞，和種苗的保綠狀況，直接影響到甘蔗組培苗假植成活率。本文主要探討NAA,IAA,Si對甘蔗組培苗的生根，以及沙床種植后甘蔗苗長勢的影響，也對硅的促進生根及保綠作用作了一些探討。較高濃度(﹥0.0001mg/L)的NAA能促進生根，在MS培養基中加入2 mg/L的NAA對云蔗99-601的生根效果最好;低濃度(﹤50mg/L)的IAA具有降低木質素，增加纖維素含量的作用，對甘蔗的莖尖脫毒苗的生根有一定的效果，并且，它對甘蔗的保綠也有一定作用，但它在促進生根方面不如NAA;在保綠方面不如硅;研究中還發現：6-BA可有效地誘導芽的萌發，對甘蔗莖尖脫毒組培苗的生根有抑制作用，因凡是MS中加入6-BA的，都沒有生根，而對照組(MS培養基)部分生根，生根率44%;硅對甘蔗莖尖脫毒組培苗的生根有促進作用，以1mg/L的效果最好。雖效果稍遜于NAA，但它能使葉綠體，基粒片層增大增多，使線粒體數增多，對組培苗的保綠有較好的效果 ，關于硅對甘蔗保綠的影響，是本實驗的一個亮點，國內外還沒有類似的報道;在2 mg/L NAA和各濃度的硅的配合實驗時，也是以0.5 mg/L的硅保綠效果最好;因NAA可使根活力下降，所以沙床種植時苗的長勢并不很好。

　　因此，甘蔗莖尖脫毒組培苗在生根和繁殖過程中，要嚴格按照以上的要求進行，才有利于提高組培苗的成活率。